RNA干扰慢流感病毒稳定株筛选

2022-02-07 02:28:26 来源:
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小分子RNA分心技术是一种专一性地阻断某些基因序列理解的研究借以,在、病原体病菌,遗传性及其它疾病的病人里均有持续发展。比较慢病原体核酸是一类来源于重组逆转录病原体的核酸,由于有着可以病菌非内部矛盾期与内部矛盾期线粒体,可容大的外源性借以 基因序列段落,免疫反应小等基本特征,现已成为转移借以 基因序列进入脊椎动物线粒体的理想核酸。将比较慢病原体核酸用于RNA分心当里,可以专一性可抑制脊椎动物的各类线粒体里基因序列的理解,成为基因序列功能研究和基因序列病人的有力借以。目前研究表明比较慢病原体核酸能在脊椎动物各类线粒体稳定理解siRNA,长期可抑制基因序列理解。为设立线粒体基本概念紧接著基因序列病人提供有效率的研究借以。

生博目前为客户挑选过几百种基因序列的分心片断,并通过比较慢病原体得到几十种稳定线粒体株。为紧接著研究基因序列病人提供了有效率依据。

BXXX1基因序列分心稳定HeLa线粒体株框架

第一其余部分:BXXX1分心核酸框架(核酸pMagic 4.1)

siRNA设计:

MarkergeneGene IDTargetSeqGC%KD1BXXX1NM_XXX4 GCCXXXXXXXXXXXXXGA47.4 KD2BXXX1NM_XXX4GGTXXXXXXXXXXXXXTAT52.6KD3BXXX1NM_XXX4CCAXXXXXXXXXXXXXTTT52.6KD4 BXXX1NM_XXX4GCAXXXXXXXXXXXXXGAA47.4pLVT4NC TTCTCCGAACGTGTCACGT 52.6

第二其余部分QPCR筛靶实验

Real-time PCR侦测结果显示: HeLa线粒体里,相对NC组, 四个小分子里,KD2,KD4对借以基因序列BXXX1的理解的敲打减半经济性达到80%以上,KD3对借以基因序列BXXX1的理解的敲打减半经济性也达到50%以上,都是有效率小分子。

第三其余部分Western blot内源验证实验报告

Western Blot侦测结果

材料说明:

M 为Marker;

1 CON为也就是说借以空线粒体(HeLa)材料;

2 NC为也就是说借以线粒体(HeLa),纳形容词对照病原体病菌的线粒体材料(Negative Control);

3 KD为也就是说借以线粒体(HeLa),纳RNAi小分子病原体病菌的线粒体材料(Knock Down)

从Western Blot结果可以显露,KD1,KD2小分子对HeLa线粒体BXXX1的理解有敲打减半效果,为有效率小分子。

第四其余部分:分心比较慢病原体KD1.、对照比较慢病原体CMV-GFP-L.V.病菌HeLa线粒体株后挑选稳定株。

HeLa 白光组 White light荧光组 Fluoresce 稀释度 Day 3, 100× BlankKD1 MOI 10KD1 MOI 20CMV-GFP MOI 10CMV-GFP MOI 20

三、实验总结:

1、HeLa线粒体病菌KD1.比较慢病原体,MOI 10、MOI 20时毒性大,活着线粒体多。若只计活线粒体,病菌经济性高,都超过80%。

2、HeLa线粒体病菌CMV-GFP-L.V.比较慢病原体,MOI 10、MOI 20时病菌经济性高,都超过90%。

3、传代培养后,最终挑选出HeLa- KD1 MOI 10稳定株,HeLa- KD1 MOI 20稳定株、HeLa- CMV-GFP MOI 20稳定株。

编辑: 陈

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